一、實(shí)驗(yàn)原理：
抗原抗體特異性結(jié)合：
抗原是能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)，抗體上的可變區(qū)能識(shí)別并結(jié)合抗原上的表位，形成穩(wěn)定的抗原-抗體復(fù)合物，這種結(jié)合具有高度特異性和親和力，是ELISA檢測(cè)的基礎(chǔ)。
二、酶標(biāo)記放大信號(hào)：
將檢測(cè)抗體或抗原與酶進(jìn)行標(biāo)記，常用的酶標(biāo)記物有辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等。酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)樣品中的抗原或抗體特異性結(jié)合，形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物。
三、酶催化底物顯色：
實(shí)驗(yàn)步驟
以雙抗體夾心法為例
（一）包被：
將特異性抗體稀釋至適當(dāng)濃度，加入微孔板中，每孔通常加100μl，用封板膜覆蓋，放入4℃冰箱中孵育過(guò)夜，使抗體固定在微孔板上。
（二）封閉：
倒掉包被液，用洗滌緩沖液如PBS-Tween20洗滌微孔板3-5次，每次300μl，最后一次拍干。加入封閉緩沖液，每孔200μl，室溫孵育1-2小時(shí)，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，倒掉封閉液，再次用洗滌緩沖液洗滌3-5次，最后一次拍干。
三、加樣：
將待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至適當(dāng)濃度，加入微孔板中，每孔100μl，設(shè)置空白對(duì)照孔，加入等體積的樣品稀釋液。
四、孵育：
用封板膜覆蓋酶標(biāo)板，放入37℃孵育箱中孵育1-2小時(shí)，使抗原-抗體反應(yīng)充分進(jìn)行。
五、洗滌：
倒掉反應(yīng)液，用洗滌緩沖液洗滌微孔板5-7次，每次300μl，最后一次拍干，以去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少背景噪音。
六、加酶標(biāo)抗體：
將酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體稀釋至適當(dāng)濃度，加入微孔板中，每孔100μl，用封板膜覆蓋，在37℃孵育箱中孵育30分鐘-1小時(shí)。
七、顯色：
倒掉酶標(biāo)抗體溶液，用洗滌緩沖液洗滌微孔板5-7次，最后一次拍干，加入底物溶液，每孔100μl，室溫避光孵育15-30分鐘，直至顯色反應(yīng)達(dá)到預(yù)期程度。
八、讀數(shù)：
加入終止液，每孔50μl，終止顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀測(cè)量各孔的吸光度，通常在450nm波長(zhǎng)下讀取。
九、結(jié)果分析
*以上內(nèi)容均來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)
